细胞计数方法（显微镜法）

细胞计数（显微镜法）：对于微生物学、细胞培养以及需要使用细胞悬浮液的生物应用试验中，测定细胞浓度非常必要。我们通常可以用分光光度法测定悬浮液的细胞密度，然而此类细胞测定不能评估细胞活力，也不能区分细胞类型。

显微镜法细胞计数

当然能有既便宜有好用的树脂类适合显微镜法使用的细胞计数板是最好的，一次性细胞计数板主要有以下几个好处：

a.一次性细胞计数板可以省去清理细胞计数板的时间;

b.一次性计数板腔体表面不会出现被磨损和污染的问题；

c.一次性细胞计数板一次成型免去盖玻片的使用；

d.液滴表面张力会影响盖玻片与计数板底部接触面问题；

e.一次性细胞计数板市场目前只有118彩票和WASTON两个品牌，118彩票的性价比更高，使用成本上较玻璃计数板更有优势。

使用传统玻璃细胞计数板时：首先需要用透镜纸仔细清洁镜面抛光表面。盖玻片也必须进行了清洁避免影响视窗。一般计数腔的盖玻片是特制的，相比传统显微镜的盖玻片更厚，因为它们必须足够重才能克服一滴液体的表面张力（一次性细胞计数板一体成型不存在液滴表面张力问题）。

在放置细胞悬浮液之前，将盖玻片放置在计数表面上。用移液器或其他类型的移液管将悬浮液引入其中一个计数腔内。盖玻片下的区域通过微流孔作用自然填充。所以应该填入足够的液体避免出现空腔，以便刚好覆盖镜面。然后将带有悬浮液的计数板放置在显微镜载物台上，并在低功率下使计数格栅聚焦。

使用更高功率的物镜时必须格外小心，因为计数腔比传统的滑块厚得多。如果用户不小心，可能会损坏腔室或物镜。在具有Neubauer的标准血细胞仪上，可以在40x（4倍物镜）处看到一个完整的网格。主要分区将网格划分为9个大正方形（如井字网格）。每个正方形的表面积为1平方毫米，腔室的深度为0.1毫米。因此，整个计数网格位于0.9毫米立方体的体积下。

比如：在使用Neubauer型计数方法时，在所述的五个小方块中计数187个细胞。每个正方形的面积为1/25平方毫米（即0.04平方毫米），深度为0.1毫米。每个正方形的总体积为（0.04）x（0.1）=0.004立方毫米。计数板中五个正方形腔，其组合体积为5x（0.004）=0.02立方毫米。因此，你计算出0.02立方毫米体体积中的含有187个细胞，得出187/（0.02）=9350个细胞/每立方体毫米。一立方厘米（相当于一毫升）= 1000立方毫米，所以你的细胞浓度是：9350000个细胞/每毫升。

如果是大细胞，需要在更大的表面积腔体上进行细胞计数。例如：选取每个正方形的表面积为1平方毫米的区域，腔体深度同样为0.1毫米，体积为0.1立方毫米。假设在五个正方形中数了125个细胞（总共）。然后，每0.5毫米立方体有125个细胞，即每立方毫米体积内有250个细胞。再次乘以1000，就可以确定250000个细胞/每毫升。

细胞浓度过大，有时需要对细胞悬浮液进行稀释，使细胞密度足够低，更方便进行细胞计数。在这种情况下，需要将最终计数浓度乘以稀释系数。例如：假设为了计数，必须将衣原体的悬浮液稀释10倍。实验获得了如上所述的250000个细胞/ml的最终计数浓度。但是，原始（未稀释）悬浮液中的计数浓度应该为10 x 250000，即2500000个细胞/ml。